產(chǎn)品及特點(diǎn)
蓋塔病毒(Getah virus，GETV)屬于RNA病毒披膜病毒科甲病毒屬成員，是一種經(jīng)蚊蟲(chóng)在脊椎動(dòng)物中傳播的蟲(chóng)媒病毒，廣泛分布于東南亞和東亞地區(qū)。已證實(shí)GETV可引起家畜的疾病，如日本和印度曾多次發(fā)生該病毒感染馬或豬而導(dǎo)致的疾病流行，近期我國(guó)湖南省某地豬群中也發(fā)生蓋塔病毒病的流行。GETV血清學(xué)調(diào)查表明，人、多種家畜及某些野生動(dòng)物中也存在該病毒感染，亞洲、歐洲、大洋洲一些國(guó)家的人、豬、馬、牛、山羊、犬、兔、袋鼠、雞和野鳥(niǎo)血清中均檢測(cè)到GETV病毒抗體，因此快速檢測(cè)蓋塔病毒具有重要的意義。本產(chǎn)品就是以探針?lè)晒舛縍T-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專(zhuān)門(mén)檢測(cè)蓋塔病毒的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)蓋塔病毒RNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他生物的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既用于定性檢測(cè)，又用于定量檢測(cè)。定量檢測(cè)時(shí)線(xiàn)性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針?lè)晒舛縬RT-PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分
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規(guī)格
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包裝
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探針?lè)?/span>qRT-PCR緩沖液
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500μL
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0.5mL藍(lán)色蓋
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探針?lè)?/span>qRT-PCR酶混合液v2
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50μL
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0.5mL紅色蓋
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熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液
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1mL
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1.5mL綠色蓋
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蓋塔病毒qRT-PCR引物-探針混合液
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50次
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0.5mL棕色蓋
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蓋塔病毒qRT-PCR陽(yáng)性對(duì)照(1×10E7拷貝/μL)
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50μL
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0.5mL黃色蓋
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使用手冊(cè)
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1份
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無(wú)
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步所得4號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)樣品RNA提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qRT-PCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)RT-PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于RT-PCR陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)RT-PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于RT-PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于RT-PCR陽(yáng)性對(duì)照（直接用第6步第4號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照Ct必須沒(méi)有數(shù)值，等于或者大于40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線(xiàn)，Ct值應(yīng)該小于40。對(duì)待測(cè)樣品，如果其Ct小于40則為陽(yáng)性。如果沒(méi)有Ct值，或大于或等于40則為陰性。
自備試劑
樣品RNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
購(gòu)物車(chē)
幫助
021-54845833/15800441009
