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猴痘病毒中非株探針法pPCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
猴痘病毒（Monkeypox Virus）屬正痘病毒屬，可在非洲綠猴腎細(xì)胞中培養(yǎng)生長，導(dǎo)致細(xì)胞病變。人類感染猴痘，主要通過被已感染的動物咬傷，或直接接觸被感染動物的血液、體液、猴痘病損而受染；通常由動物傳給人，偶也可以發(fā)生人到人的猴痘傳播。一般認(rèn)為是在直接的、長時(shí)間面對面的接觸中，通過含毒的大量呼吸飛沫而傳播。猴痘還可以通過直接接觸感染者的體液或病毒污染的物品（如衣服和被褥）而傳播。主要臨床癥狀為發(fā)熱、劇烈頭痛、淋巴結(jié)腫大、背痛、肌肉痛（肌肉疼痛）以及倍感無力（精神不振）。猴痘病毒有兩個(gè)主要毒株：中非（剛果盆地）株和西非株。前者死亡率高達(dá)10%，而西非株的致死率約為1%，因此快速檢測猴痘病毒中非株具有重要的意義。本產(chǎn)品就是以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測猴痘病毒中非株的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
猴痘病毒（Monkeypox Virus）屬正痘病毒屬，可在非洲綠猴腎細(xì)胞中培養(yǎng)生長，導(dǎo)致細(xì)胞病變。人類感染猴痘，主要通過被已感染的動物咬傷，或直接接觸被感染動物的血液、體液、猴痘病損而受染；通常由動物傳給人，偶也可以發(fā)生人到人的猴痘傳播。一般認(rèn)為是在直接的、長時(shí)間面對面的接觸中，通過含毒的大量呼吸飛沫而傳播。猴痘還可以通過直接接觸感染者的體液或病毒污染的物品（如衣服和被褥）而傳播。主要臨床癥狀為發(fā)熱、劇烈頭痛、淋巴結(jié)腫大、背痛、肌肉痛（肌肉疼痛）以及倍感無力（精神不振）。猴痘病毒有兩個(gè)主要毒株：中非（剛果盆地）株和西非株。前者死亡率高達(dá)10%，而西非株的致死率約為1%，因此快速檢測猴痘病毒中非株具有重要的意義。本產(chǎn)品就是以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測猴痘病毒中非株的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)猴痘病毒中非株DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)蓋管 |
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猴痘病毒中非株qPCR引物-探針混合液 |
50μL |
0.5mL棕色管 |
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猴痘病毒中非株qPCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
1份 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽性對照（直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于40，否則實(shí)驗(yàn)無效。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
