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科研實(shí)驗(yàn)知識(shí):認(rèn)識(shí)抗原抗體反應(yīng)的類型

發(fā)布時(shí)間:2024-01-23     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  抗原抗體反應(yīng)或抗原抗體相互作用是免疫反應(yīng)過(guò)程中白細(xì)胞B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體與抗原之間發(fā)生的一種特殊的化學(xué)相互作用。凝集過(guò)程結(jié)合了抗原和抗體。


  這是身體用來(lái)防御各種外來(lái)顆粒(如病毒及其有毒化學(xué)物質(zhì))的基本生物過(guò)程。當(dāng)抗體與抗原特異性且強(qiáng)烈地結(jié)合時(shí),血液中會(huì)形成抗原-抗體復(fù)合物。免疫復(fù)合物隨后被轉(zhuǎn)移到細(xì)胞系統(tǒng)中,在那里它可以被消除或失活。


  目錄


  抗原(Ag)

  抗體(Ab)

  抗原抗體反應(yīng)

  抗原抗體反應(yīng)的類型

  常見(jiàn)問(wèn)題(FAQ)


  抗原(Ag)


  (Anti=相反;gen=導(dǎo)致的任何事物)


  免疫原是任何外來(lái)物質(zhì),一旦進(jìn)入我們的身體,通常會(huì)引起一系列免疫反應(yīng)。而其他分子(稱為半抗原)則需要其他分子(載體蛋白)的幫助才能激活免疫反應(yīng)。所有的免疫原和半抗原都稱為抗原。



  •   它們可以是多糖、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)或肽。
  •   表位是抗體結(jié)合位置。



  抗體(Ab)


  抗體是免疫系統(tǒng)響應(yīng)抗原而產(chǎn)生的成分。因此,抗原導(dǎo)致抗體的產(chǎn)生。它們共同作用以表現(xiàn)出免疫反應(yīng)??贵w的一般特征如下:



  •   抗體也稱為免疫球蛋白(Ig)
  •   它們是Y形的
  •   糖蛋白
  •   由血漿B細(xì)胞產(chǎn)生。
  •   互補(bǔ)位是抗原結(jié)合位點(diǎn)的名稱。
  •   五種類型:IgG、IgA、IgM、IgE和IgD。

相關(guān)閱讀:《ELISA 抗體:概述與應(yīng)用


  抗原抗體反應(yīng)


  抗原和抗體彼此特異性結(jié)合??乖贵w反應(yīng)是用于描述它們之間相互作用的術(shù)語(yǔ)。Ag-Ab反應(yīng)是它的常見(jiàn)縮寫(xiě)。它們是體液或抗體介導(dǎo)的免疫的基礎(chǔ)。


  這些反應(yīng)是檢測(cè)特異性和非特異性抗原(例如引起非特異性疾病的酶)的基礎(chǔ)。體外發(fā)生的血清學(xué)反應(yīng)稱為Ag-Ab反應(yīng)。


  抗原抗體反應(yīng)的階段


  Ag和Ab之間的相互作用分為三個(gè)階段。



  •   反應(yīng)的第一階段需要形成Ag-Ab復(fù)合物。
  •   第二階段導(dǎo)致凝集、沉淀等可見(jiàn)現(xiàn)象。
  •   第三階段涉及Ag的破壞或Ag的中和。



  抗原抗體反應(yīng)的性質(zhì)



  •   顯著特異性反應(yīng)
  •   以明顯的方式發(fā)生
  •   非共價(jià)反應(yīng)(離子鍵、范德華力、疏水相互作用、氫鍵)
  •   抗體和抗原不會(huì)變性
  •   可逆
  •   親和力:這是指抗原與抗體上特定抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合的強(qiáng)度。



  親和力:它是一個(gè)比親和力更普遍的概念。它代表Ag-Ab復(fù)合物的總強(qiáng)度。這取決于:


  1.抗體的親和力


  2.抗體和抗原價(jià)(結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)量)


  3.表位和互補(bǔ)位的結(jié)構(gòu)排列方式。


  交叉反應(yīng)性:該術(shù)語(yǔ)描述抗體與其他抗原上的相似表位結(jié)合的能力。


  抗原抗體反應(yīng)的類型


  抗原抗體反應(yīng)的類型如下:



  •   沉淀反應(yīng)
  •   凝集反應(yīng)
  •   補(bǔ)體固定
  •   免疫熒光
  •   ELISA–酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定



  沉淀反應(yīng)


  當(dāng)可溶性Ag與其Ab在特定pH值和溫度下、電解質(zhì)(NaCl)存在下結(jié)合時(shí),會(huì)產(chǎn)生Ag-Ab復(fù)合物的不溶性沉淀。沉淀素是引起沉淀的抗體,該反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)。


  沉淀反應(yīng)發(fā)生在液體和凝膠介質(zhì)中。



  •   液體沉淀:通過(guò)向含有恒定量抗體的試管中添加逐漸增加的量的抗原來(lái)進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)。沉淀是抗原和抗體結(jié)合反應(yīng)的結(jié)果。
  •   凝膠沉淀:這些方法中使用培養(yǎng)皿或帶有瓊脂凝膠或類似凝膠的平板。在凝膠系統(tǒng)中,Ag和Ab都快速向各個(gè)方向擴(kuò)散。根據(jù)反應(yīng)物的擴(kuò)散速率和濃度,將在特定點(diǎn)形成等效區(qū)域(觀察為可見(jiàn)沉淀)。


  復(fù)雜的Ag或Ab制劑中會(huì)出現(xiàn)多個(gè)條帶。它們分為兩種方法:單擴(kuò)散和雙擴(kuò)散。


  凝集反應(yīng)


  當(dāng)某種銀與其抗體在適當(dāng)溫度和pH值的電解質(zhì)存在下結(jié)合時(shí),顆粒會(huì)聚集或凝集。由血清抗體形成的細(xì)胞Ag團(tuán)塊稱為凝集素。


  凝集原是聚集顆粒抗原的名稱。



  •   玻片凝集:這是一種快速、方便的方法來(lái)識(shí)別凝集抗體的存在。
  •   試管凝集:這是估計(jì)抗體數(shù)量的常用技術(shù)。在多個(gè)小試管中用鹽水連續(xù)稀釋含抗體血清后引入恒定體積的Ag懸浮液。



  保留不含抗血清的對(duì)照管。將管孵育直至可觀察到凝集。表現(xiàn)出最高凝集的試管稱為滴度。



  •   被動(dòng)凝集試驗(yàn):該試驗(yàn)相當(dāng)于血凝試驗(yàn),但反應(yīng)的物理特性不同。


  載體顆粒表面涂有銀,有助于將沉淀過(guò)程轉(zhuǎn)變?yōu)槟磻?yīng),從而使反應(yīng)更加靈敏。紅細(xì)胞、乳膠顆?;蚺驖?rùn)土可用作載體顆粒。有時(shí),可能會(huì)使用曬黑的紅細(xì)胞(聚苯乙烯涂層紅細(xì)胞)。


  補(bǔ)體固定


  紅細(xì)胞或微生物的裂解需要一些非特異性、不穩(wěn)定的新鮮血清成分(稱為補(bǔ)體)。


  每個(gè)人都有構(gòu)成補(bǔ)體系統(tǒng)的11種蛋白質(zhì)。它們附著在Ag-Ab復(fù)合物中Ab的Fc亞基上。補(bǔ)體固定測(cè)試?yán)肁g-Ab復(fù)合物固定補(bǔ)體的能力。


  第一步,將測(cè)試抗原和抗血清加熱至56°C以滅活補(bǔ)體,并與已知量的補(bǔ)體結(jié)合。將其在4°C下孵育18小時(shí)。


  如果血清中含有針對(duì)Ag的特異性抗體,則會(huì)形成Ag-Ab復(fù)合物并固定補(bǔ)體。


  免疫熒光


  熒光是吸收特定波長(zhǎng)的光線并發(fā)射不同波長(zhǎng)的光線的能力。


  當(dāng)暴露于紫外線輻射時(shí),熒光染料會(huì)發(fā)出強(qiáng)烈的可見(jiàn)光。


  1942年,Albert Coons及其同事演示了標(biāo)記染料如何與抗體偶聯(lián),從而可以使用這些標(biāo)記染料檢測(cè)抗原。


  常用的染料包括


  免疫熒光操作中最常用的標(biāo)記是熒光素,這是一種吸收藍(lán)光(490 nm)并發(fā)出強(qiáng)烈黃綠色熒光(517 nm)的有機(jī)染料。


  作為強(qiáng)烈的紅色熒光發(fā)射體和有效的光吸收劑(比熒光素有效30倍),藻紅蛋白通常用作免疫熒光的標(biāo)記物。


  ELISA–酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定


  1971年,酶標(biāo)記的Ag和Ab被創(chuàng)建為用于檢測(cè)抗體和抗原的血清學(xué)試劑。


  與放射免疫分析(RIA)相比,它們更簡(jiǎn)單、靈敏、價(jià)格實(shí)惠且無(wú)風(fēng)險(xiǎn)。


  所使用的配體是與過(guò)氧化物酶、β-半乳糖苷酶、堿性磷酸酶等酶共價(jià)連接的分子,并且能夠檢測(cè)抗體。


  ELISA共有三種類型:


  間接ELISA:可以使用間接ELISA方法檢測(cè)HIV。微量滴定板的表面涂有利用重組技術(shù)開(kāi)發(fā)的包膜蛋白。當(dāng)添加可疑血清時(shí),未結(jié)合的蛋白質(zhì)被洗掉。


  夾心ELISA:該方法用于確定樣品中是否存在Ag。在孔涂有Ag特異性抗體后,添加可疑血清并給予反應(yīng)時(shí)間。通過(guò)清洗將未結(jié)合的Ag從孔中去除。


  下一步是針對(duì)不同的Ag表位添加標(biāo)記的Ab。洗滌用于去除未結(jié)合的抗體,然后添加有色底物并顯色。顏色強(qiáng)度與血清中的Ag濃度成正比。


  競(jìng)爭(zhēng)性ELISA:競(jìng)爭(zhēng)性ELISA是估計(jì)抗原濃度的另一種變體。在此方法中,抗體最初在溶液中與含有抗原的樣品一起孵育。


  然后用抗原-抗體混合物填充抗原包被的微量滴定孔。


  當(dāng)樣品中存在更多抗原時(shí),可附著在抗原包被孔上的游離抗體將會(huì)減少。在間接ELISA中,添加涂有針對(duì)一抗同種型的酶的二抗(Ab2),可用于估計(jì)每個(gè)孔中附著的一抗數(shù)量。


  因此,我們通過(guò)對(duì)抗原抗體反應(yīng)的簡(jiǎn)要概述來(lái)結(jié)束本次討論??贵w和抗原之間的特異性相互作用導(dǎo)致組合,稱為抗原-抗體反應(yīng)或抗原-抗體相互作用。


相關(guān)閱讀認(rèn)識(shí)免疫學(xué)試驗(yàn)——酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (ELISA)


  常見(jiàn)問(wèn)題–常見(jiàn)問(wèn)題解答


  Q1


  抗原有哪三種類型?


  抗原可分為三類。外源性(宿主免疫系統(tǒng)的外來(lái)物)、內(nèi)源性(由宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖的內(nèi)部細(xì)菌和病毒產(chǎn)生)和自身抗原(由宿主產(chǎn)生)是描述抗原的三種基本技術(shù)。


  Q2


  抗原是由什么組成的?


  肽、蛋白質(zhì)和多糖組成抗原??乖梢允羌?xì)菌或病毒的任何成分,包括涂層、表面蛋白、毒素、莢膜和細(xì)胞壁。


  Q3


 抗體有哪五種類型?


  根據(jù)構(gòu)成這些區(qū)域的五種不同類型的鏈恒定區(qū),抗體(免疫球蛋白)分為IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。它們分布在全身各處并具有多種功能。

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