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021-54845833/15800441009
呋喃西林代謝物(SEM)ELISA試劑盒
簡介
呋喃西林屬于硝基呋喃類抗菌藥物，可用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染引起的腸道感染疾病，因其不易產(chǎn)生抗藥性，曾經(jīng)被廣泛應(yīng)用于禽類、畜類和水產(chǎn)類動物的養(yǎng)殖中。養(yǎng)殖過程中使用呋喃西林藥物和食品消毒與漂白過程中使用次氯酸鹽會造成氨基脲殘留，其代謝物（氨基脲）屬于致癌化學(xué)物的一種，氨基脲會在生物體內(nèi)與細(xì)胞膜蛋白結(jié)合形成穩(wěn)定的結(jié)合態(tài)，并且會長期存在。普通的蒸煮、焙烤、磨碎或微波加熱方式均無法有效降解其在食物中的殘留量，人體若長期食用此類食物會造成嚴(yán)重?fù)p害。本酶聯(lián)免疫檢測試劑盒可以經(jīng)濟、快速地檢測動物組織（肌肉、肝臟）、蜂蜜等樣品中的呋喃西林代謝物的殘留量。
檢測原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中呋喃西林和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭呋喃西林抗體，加入酶標(biāo)二抗后，形成包被抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物。隨后結(jié)合的酶催化TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的呋喃西林成負(fù)相關(guān)。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可準(zhǔn)確定量樣品中呋喃西林的含量。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算所得值乘以樣品處理的稀釋倍數(shù)即為實際樣品中呋喃西林的含量。
需要的其他材料
1. 酶標(biāo)儀，包含450nm測定波長，同時包含600-680nm校正波長更佳；
2. 移液器及槍頭；
3. 蒸餾水或去離子水；
4. 100-1000mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機；
6. 水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
試劑準(zhǔn)備
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標(biāo)準(zhǔn)品配置
試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品，準(zhǔn)備7個試管，先將1000ppb標(biāo)準(zhǔn)品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至1ppb（例：1μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+999μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的1ppb濃度標(biāo)準(zhǔn)品），隨后在5個試管中分別加入400μL的1×稀釋液，在這6個單獨的試管中將1ppb標(biāo)準(zhǔn)品依次3倍倍比稀釋至5個梯度，共配制5個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，依次為：1ppb、0.3ppb、0.1ppb、0.03ppb、0.01ppb、0.003ppb，從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取200μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0ppb)。
一抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×一抗工作液稀釋成1×一抗工作液，根據(jù)所需用量配置。
酶標(biāo)二抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×酶標(biāo)二抗稀釋成1×酶標(biāo)抗體工作液，根據(jù)所需用量配置。
備 注：如樣本中待測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請根據(jù)實際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù) (建議：將待測樣本用樣品稀釋液最低稀釋1倍，在正式實驗之前做預(yù)實驗，以確定具體稀釋倍數(shù)) ；標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)二抗溶液根據(jù)實驗所需酶標(biāo)板孔數(shù)吸取一定量配制工作液，剩余溶液應(yīng)放回-20℃儲存，且避免反復(fù)凍融。（若實驗在1-2周內(nèi)做完，標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)抗體置于2-8℃保存；若實驗為長時間跨度實驗，建議將標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)抗體置于-20℃保存，以保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性）
結(jié)果的計算
計算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時去掉空白組的值)?；蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
精密度
批內(nèi)精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。
批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于10%。
批間精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。
批間變異系數(shù) CV%小于15%。
回收率
樣本回收率：80% - 120%
靈敏度
經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為0.003 ppb。
線性關(guān)系
校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.999。
本ELISA試劑盒實驗計算和曲線圖，請您下載產(chǎn)品說明書(供參考），本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷和治療。
