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021-54845833/15800441009
細胞基本信息
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細胞名稱 |
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細胞品牌 |
通蔚生物 |
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種屬來源 |
人 |
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年齡性別 |
女；62歲 |
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組織來源 |
胃 |
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生長特性 |
貼壁生長 |
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細胞形態(tài) |
上皮細胞樣 |
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細胞代數(shù) |
10代以內(nèi) |
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特別注意 |
MKN-45細胞生長過程中容易成團，消化時間需要控制好，不能吹打過猛，吹打過猛容易產(chǎn)生細胞碎片，導致皿底變臟。 |
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細胞簡介 |
MKN-45細胞是由S·Akiyama建立，源于日本一位62歲患有印戒細胞癌的女性的胃淋巴結(jié)。 |
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使用權(quán)限 |
A類 |
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細胞規(guī)格 |
1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
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支原體檢測 |
無 |
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培養(yǎng)基 |
RPMI1640+10%FBS+PS,藥物抗性維持加藥濃度為5uM Cisplatin。 |
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培養(yǎng)條件 |
氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ |
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凍存條件 |
無血清凍存液，液氮儲存 |
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細胞貨期 |
現(xiàn)貨，1周左右 |
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發(fā)貨方式 |
復蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） |
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供應范圍 |
僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 |
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特別說明 |
具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 |
細胞培養(yǎng)操作
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T25瓶 |
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收貨處理 |
用75%酒精擦拭細胞瓶表面，放37度培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4h，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài) |
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傳代密度 |
細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng) |
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傳代比例 |
首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 |
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傳代方法 |
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b. 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-5 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 |
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注意事項
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1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。 |
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凍存管 |
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收貨處理 |
收到細胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇 |
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傳代密度 |
第二天換液并檢查細胞密度 |
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傳代比例 |
一管細胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 |
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傳代方法 |
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）第二天換液并檢查細胞密度。 |
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1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存。 2.為保證細胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復蘇細胞。 |
細胞凍存操作
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凍存液配方 |
無血清凍存液，液氮儲存 |
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細胞密度 |
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例 |
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凍存方法 |
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。 b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
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注意事項 |
凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案 |
售后服務
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細胞予 |
1.細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)。 |
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2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。 |
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3.收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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4.常溫發(fā)貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細胞復蘇2天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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5.常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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6.細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品3天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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細胞不予 |
1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。 |
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2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。 |
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3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。 |
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4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。 |
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5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。 |
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6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。 |
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特別說明 |
上海通蔚生物客戶在細胞培養(yǎng)過程中,有任何技術(shù)問題可以撥打免費服務電話 : 021-54845833 ,我們隨時給予實驗中的免費解答。 |
