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產品及特點
腦膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis，Nm）是世界范圍內主要的流行病原菌之一，是導致流行性腦膜炎（簡稱流腦）的主要因素之一，嚴重時還能造成腦膜炎球菌敗血癥、血管炎及各種神經系統(tǒng)后遺癥。人類是Nm唯一易感宿主，主要通過說話、打噴嚏等飛沫直接從空氣傳播，使Nm進入呼吸道而引起感染。Nm根據其莢膜多糖抗原表位的不同，分為A、B、C、D、29E、H、I、K、L、W135、X、Y和Z共13個血清群的菌群，其中A、B、C、W135、Y這5個血清群引起的疾病占全世界范圍內流行菌群侵襲性發(fā)病率的90%以上。本產品就是以三重探針法熒光定量PCR技術為基礎開發(fā)的專門檢測腦膜炎A、B、Y群試劑盒，它具有下列特點：
腦膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis，Nm）是世界范圍內主要的流行病原菌之一，是導致流行性腦膜炎（簡稱流腦）的主要因素之一，嚴重時還能造成腦膜炎球菌敗血癥、血管炎及各種神經系統(tǒng)后遺癥。人類是Nm唯一易感宿主，主要通過說話、打噴嚏等飛沫直接從空氣傳播，使Nm進入呼吸道而引起感染。Nm根據其莢膜多糖抗原表位的不同，分為A、B、C、D、29E、H、I、K、L、W135、X、Y和Z共13個血清群的菌群，其中A、B、C、W135、Y這5個血清群引起的疾病占全世界范圍內流行菌群侵襲性發(fā)病率的90%以上。本產品就是以三重探針法熒光定量PCR技術為基礎開發(fā)的專門檢測腦膜炎A、B、Y群試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 根據腦膜炎A/B/Y 保守區(qū)域設計引物，靈敏度均在100拷貝/反應左右。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。
5. 本產品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應。
6. 本產品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
500μL(本色蓋） |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL(綠色蓋） |
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流腦A,B,Y群探針法qPCR引物-探針混合液 |
150μL(棕色管） |
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流腦A,B,Y群探針法qPCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL) |
50μL(黃色蓋） |
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使用手冊 |
1份 |
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本產品采用五孔盒包裝 |
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使用方法
稀釋PCR陽性對照以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。本陽性對照由流感A、B和Y群專一性的三種DNA片段組成。
稀釋PCR陽性對照以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。本陽性對照由流感A、B和Y群專一性的三種DNA片段組成。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL的陽性對照（試劑盒提供），充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。換槍頭，在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5μL 1×10E5拷貝/μL的陽性對照（上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是樣品制備PC（樣品制備陽性對照），一個是樣品制備NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為樣品制備PC。另外用水作為樣品制備NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數DNA提取試劑盒兼容。
Probe qPCR反應20μL體系，在樣品制備室進行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（用第4號管中的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為描述操作步驟。
數據處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。一次實驗可以得到三種靶分子的標準曲線，FAM通道得到的數據是A群的，HEX通道得到的數據是B的，ROX通道得到的數據是Y群。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照Ct必須大于或等于45。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于或等于40。對待測樣品，如果其Ct大于或等于45則為陰性，如果小于或等于40則為陽性。如果在40-45之間，則重復一次。若重復結果Ct值小于45，擴增曲線有明顯起峰，該樣本判斷為陽性，否則為陰性。一次實驗可以得到三種靶分子的Ct，FAM通道得到的數據是A群的，HEX通道得到的數據是B的，ROX通道得到的數據是Y群。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
