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品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

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產(chǎn)品中心

  • 麩質(zhì)源性成分探針法qPCR試劑盒

    規(guī)格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-E10453
    • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
    • 貨期 : 2年
    • 規(guī)格 :50T
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產(chǎn)品及特點

本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有麩質(zhì)的成分?,F(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性,因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M行準(zhǔn)確的鑒定。同時部分食材還有致敏性,因此基于基因檢測的、快速靈敏的食材來源檢測技術(shù)將對食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。此外還有很多情況需要檢測非食品樣本中是否有麩質(zhì)源性成分。本產(chǎn)品就是為滿足這些需求根據(jù)PCR原理開發(fā)的產(chǎn)品,它具有下列特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏度高,檢測限可達100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)麩質(zhì)基因組DNA高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其它生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可定性檢測,又可定量檢測。定量檢測時,線性范圍至少5個數(shù)量級。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成分

規(guī)格

包裝

2×Probe qPCR MasterMix

0.5mL

0.5mL本色

熒光PCR專用模板稀釋液

1mL

1.5mL綠蓋管

超純水

1mL

1.5mL藍蓋管

麩質(zhì)源性成分qPCR引物-探針干粉

50次

0.5mL棕色管

麩質(zhì)源性成分陽性對照(1E7拷貝/μL)

50μL

0.5mL黃蓋管

使用手冊

1份

本產(chǎn)品采用五孔盒包裝

意:引物-探針干粉在使用前需要離心,然后在離心管中加入165mL的超純水充分混勻后再使用,未用完的需要-20℃保存。


使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例

由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供DNA片段作為陽性對照。

1. 標(biāo)記6個離心管,分別為6、5、4、3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭(下同)。
3. 在6號管中加入5 μL 1E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩混勻1分鐘,得到1E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩混勻1分鐘,得到1E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在4號管中加入5 μL 1E5拷貝/μL的陽性對照(上步所得),充分震蕩混勻1分鐘,得到1E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 依次重復(fù)上面的操作得到6個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品,設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10 μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
qPCR 反應(yīng)20 μL體系,在樣品制備室進行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

數(shù)據(jù)處理
1. 如果擴增陽性對照或制備陽性對照結(jié)果為陰性,則整個擴增或制備實驗無效,不需要分析數(shù)據(jù),需要重做擴增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果擴增陰性對照或制備陰性對照結(jié)果為陽性,說明環(huán)境污染,則整個擴增或制備實驗無效,不需要分析數(shù)據(jù),需要跟廠家聯(lián)系,購買新的引物和探針。
2. 如果陰性對照和陽性對照正常,則實驗有效,可以進入后續(xù)分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct值應(yīng)該小于40,否則實驗無效。如果實驗有效,則分析待測樣品,如果無Ct或Ct大于或等于40,則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。

自備試劑
超純水,樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,有效期2年
產(chǎn)品掃碼查看詳情
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