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昆津病毒(Kunjin Virus，KUNV)屬于黃病毒科黃病毒屬的病毒，為單股正鏈RNA，基因組約在11000 nt左右。它的復(fù)制子具有表達(dá)效率高、細(xì)胞毒性低和遺傳穩(wěn)定等特點(diǎn)，因此在病毒基因組復(fù)制調(diào)控機(jī)制、外源蛋白表達(dá)、新型疫苗和基因治療等領(lǐng)域得到了廣泛的研究和應(yīng)用。昆津病毒具有潛在的感染人類(lèi)的能力，并能引起類(lèi)似西尼羅河病毒感染的癥狀，包括發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、皮疹和肌肉疼痛等，給人類(lèi)健康造成重大威脅，因此快速檢測(cè)昆津病毒具有重要的意義。為此，本公司以探針?lè)╭RT-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)了昆津病毒的檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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探針?lè)?/span>qRT-PCR緩沖液 |
500μL |
0.5mL藍(lán)蓋管 |
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探針?lè)?/span>qRT-PCR酶混合液v2 |
50μL |
0.5mL紅蓋管 |
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熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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昆津病毒qRT-PCR引物-探針干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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昆津病毒qRT-PCR陽(yáng)性對(duì)照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
1份 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品 以1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。如果需要RNA陽(yáng)性樣品，需要另外訂購(gòu)。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6、5、4、3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品RNA的制備
樣品RNA，超純水，核酸純化試劑盒
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
