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  • 小鼠Gremlin1蛋白(GREM1)ELISA試劑盒

    規(guī)格:
    價(jià)格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號(hào) : TW-E4132
    • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
    • 英文名 :Mouse GREM1 ELISA KIT
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 靈敏度 :0.08ng/mL
    • 規(guī)格 :48T/96T
    • 檢測(cè)范圍 :0.157 ~ 10ng/mL
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小鼠Gremlin1蛋白(GREM1)ELISA試劑盒
簡(jiǎn)介
Gremlin是TGF beta信號(hào)通路的一個(gè)抑制劑,它主要抑制骨形態(tài)的形成,并與骨形成增加的疾病和一些癌癥有關(guān)聯(lián),Gremlin1以前被稱為Drm,是一種高度保守的20.7kDa、184個(gè)氨基酸的糖蛋白,屬于DAN家族,是一種半胱氨酸結(jié)分泌的蛋白,Gremlin1(Grem1)因其在TGF beta信號(hào)傳導(dǎo)途徑中與骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)的拮抗作用而聞名,Grem1主要抑制肢體芽中的BMP2和BMP4,并作為自我調(diào)節(jié)反饋信號(hào)系統(tǒng)的一部分發(fā)揮作用,Grem1對(duì)肢芽中BMPs的抑制使成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGFs)4和8以及聲猬(SHH)配體的轉(zhuǎn)錄上調(diào),這是控制肢芽發(fā)育進(jìn)展的信號(hào)系統(tǒng)的一部分,Grem1對(duì)小鼠胚胎中BMP4的調(diào)節(jié)也是腎臟和肺部分支形態(tài)形成的關(guān)鍵。
檢測(cè)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù):將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上,捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測(cè)物GREM1,清洗后,再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行孵育后清洗,形成“捕獲抗體-抗原-檢測(cè)抗體”免疫復(fù)合物,隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過(guò)氧化物酶進(jìn)行孵育,待孵育結(jié)束后清洗,接著加入TMB顯色后,若樣本中有待測(cè)物則顯藍(lán)色,加入終止液停止反應(yīng)。檢測(cè)過(guò)程中游離的成分均被洗去,用酶標(biāo)儀在450 nm處測(cè)OD值,顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物的含量呈正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中GREM1的濃度。
需要的其他材料
1.  酶標(biāo)儀,包含450nm測(cè)定波長(zhǎng),同時(shí)包含600-680nm校正波長(zhǎng)更佳;
2.  移液器及槍頭;
3.  蒸餾水或去離子水;
4.  100-1000 mL刻度量筒;
5.  洗瓶、排槍或自動(dòng)微孔板清洗機(jī);
6.  水平軌道微孔板振蕩器,能夠保持500±50 rpm的速度;
7.  用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
樣品保存
樣品收集后若在 1 周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃,若不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),避免反復(fù)凍融,標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
試劑準(zhǔn)備工作
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液(20×)有晶體析出,需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋(例如:1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水)
標(biāo)準(zhǔn)品配置
試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品,準(zhǔn)備7個(gè)試管,先從200ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品(200μL)按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至10ng/mL(例:50μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+950μL的1×稀釋液,制備得到1000μL的10ng/mL濃度標(biāo)準(zhǔn)品),隨后在6個(gè)試管中分別加入500μL的1×稀釋液,在這6個(gè)單獨(dú)的試管中將10ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品依次2倍倍比稀釋至6個(gè)梯度,共配制7個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,依次為:  10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、 1.25ng/mL、0.625ng/mL、 0.313ng/mL、 0.157ng/mL,從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取500μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個(gè)試管中,輕輕吹打混勻,以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋(如圖所示),1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0ng/mL)。

小鼠(GREM1)ELISA試劑盒

抗體工作液配置
使用前10分鐘,將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液,根據(jù)所需用量當(dāng)日配置當(dāng)日使用。
酶結(jié)合物工作液配置
使用前10分鐘,將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液,根據(jù)所需用量配置。
備 注:如待測(cè)樣本中GREM1濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
結(jié)果的計(jì)算
計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時(shí)去掉空白組的值)?;蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯(4-P)曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來(lái)創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。
若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)并在計(jì)算樣本濃度時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
示例數(shù)據(jù)

以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)

10

5

2.5

1.25

0.625

0.313

0.157

0

OD值

2.403

1.625

0.973

0.777

0.52

0.219

0.192

0.074

校正OD值

2.329

1.551

0.899

0.703

0.446

0.145

0.118

0


下圖所示標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供示例,結(jié)果計(jì)算應(yīng)以同次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線為準(zhǔn)計(jì)算樣本結(jié)果

小鼠(GREM1)ELISA試劑盒

重復(fù)性
板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于10%。
靈敏度 
經(jīng)樣本測(cè)試,本試劑盒的檢測(cè)靈敏度為0.08ng/mL。
特異性
該試劑盒測(cè)定可識(shí)別重組小鼠GREM1。
其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL,并測(cè)定交叉反應(yīng)性。沒(méi)有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。
使用ELISA試劑盒之前,請(qǐng)您必須完整閱讀說(shuō)明書,本產(chǎn)品僅供科研使用,不能于臨床診斷或治療
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