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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ：小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：腦組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介
小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞分離腦組織。多巴胺神經(jīng)元，即：胺能神經(jīng)元，主要指含多巴胺的神經(jīng)元，其細(xì)胞體主要分布在黑質(zhì)、腳間核和丘腦下部等處。在這些區(qū)域多巴胺含量很高。多巴胺在機(jī)體內(nèi)合成時(shí)以酪氨酸為原料。腦內(nèi)的多巴胺主要是由黑質(zhì)細(xì)胞來合成，這些多巴胺參與錐體外系統(tǒng)的活動(dòng)，與軀體運(yùn)動(dòng)機(jī)能有密切關(guān)系。
腦內(nèi)多巴胺代謝失常時(shí)，可引起震顫性麻痹(帕金森震顫) 。多巴胺(D opamine) ，是N A 的前體物質(zhì)，是下丘腦和腦垂體腺中的一種關(guān)鍵神經(jīng)遞質(zhì)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)中多巴胺的濃度受精神因素的影響，神經(jīng)末梢的G nR H 和多巴胺間存在著軸突聯(lián)系并相互作用，以及多巴胺有抑制G nR H 分泌的作用。
中腦的神經(jīng)原物質(zhì)多巴胺(D opamine) ，則直接影響人們的情緒。從理論上來看，增加這種物質(zhì)，就能讓人興奮，但是它會(huì)令人上癮。多巴胺在前腦和基底神經(jīng)節(jié)(BasalG anglia) 出現(xiàn)，基底神經(jīng)節(jié)負(fù)責(zé)處理恐懼的情緒，但由于多巴胺的緣故，取代了恐懼的感覺，因此有很多人的上癮行為，都是因多巴胺而起的。
方法簡介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞采用胰蛋白酶消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)T H 免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml)
培 養(yǎng) 基 ：含B-27 Supplem ent、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細(xì)胞形態(tài) ：神經(jīng)元細(xì)胞樣
傳代特性 ：屬于終末分化細(xì)胞。屬于不增殖細(xì)胞群
傳代比例 ：不傳代
消 化 液 ：0. 125% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相：空氣，95% 。C O2，5%
小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈神經(jīng)元細(xì)胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞屬于終末分化細(xì)胞。屬于不增殖細(xì)胞群。建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 靜置后，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，拍照記錄細(xì)胞的貼壁情況，漂浮的細(xì)胞需離心收集后在離心管消化(脫落細(xì)胞處理方式) ，貼壁細(xì)胞也需消化后與脫落的細(xì)胞合并一起后重新接種。
3. 神經(jīng)元細(xì)胞消化
1) 將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細(xì)胞(1200rpm5min) ，細(xì)胞沉淀按照下面脫落細(xì)胞處理方式處理該部分細(xì)胞。
2) 培養(yǎng)瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞，用PBS(37℃預(yù)熱) 清洗細(xì)胞一次，將PBS收集到步驟1的離心管中，不要直接丟棄。
3) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，放入4℃冰箱消化細(xì)胞3-5min(或者37℃溫浴1min ) 。
4) 倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化(稀釋法終止消
化，培養(yǎng)基用量不低于5ml) 。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞，1200rpm 5min 離心去除殘留胰酶。
6) 去掉上清，加入適量的完全培養(yǎng)基混勻(可補(bǔ)加1% FB S，促進(jìn)貼壁) ，接種于孔板中(提前多聚賴氨酸包被孔板) 。
7) 待細(xì)胞貼壁后可用于后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
4. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液，1200rpm 5min離心，保留沉淀。
2) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至離心管中，輕柔重懸沉淀，放置4℃冰箱靜置3-5min ) 。
3) 消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
4) 經(jīng)1200rpm ，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基(可補(bǔ)加1% FBS，促進(jìn)貼壁) 重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
5) 接種后絕對靜置24-48小時(shí)， 48小時(shí)后觀察，否則細(xì)胞容易聚團(tuán)。
5. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ （2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/ml），明膠（0. 1% ），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
特殊注意事項(xiàng)
5. 神經(jīng)元細(xì)胞貼壁不牢，必須包被培養(yǎng)器皿。細(xì)胞遇冷易收縮脫落，所用試劑需37℃預(yù)熱，室溫觀察時(shí)間不宜過長。
